一、試劑盒簡介

EZBioscience 一步法升級版試劑盒，for microRNA直接用于從培養(yǎng)的細(xì)胞裂解物中快速方便地進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。首先在細(xì)胞裂解緩沖液中裂解細(xì)胞以釋放微小RNA。然后，用gDNA去除劑處理細(xì)胞裂解液，以消除污染的基因組DNA。最后，聚腺苷酸化和逆轉(zhuǎn)錄在同一反應(yīng)系統(tǒng)中一步完成。

EZBioscience 一步法升級版試劑盒，for microRNA包含6管試劑:細(xì)胞裂解緩沖液，gDNA去除劑，miRNART酶混合物，4xmiRNART緩沖液，正向U6引物和通用aPCR反向引物(Universal3'aPCR引物)，可用干所有miRNA的定量檢測。因此，aPCR反應(yīng)僅需要每個靶標(biāo)miRNA的特異性正向引物。

miRNART酶混合物主要包含大腸桿菌Poly(A)聚合酶，逆轉(zhuǎn)錄酶和RNase抑制劑。其中，大腸桿菌Poly(A)聚合酶不僅具有添加poly(A)尾部的高效率，而且可以特異性識別單鏈成熟miRNA，從而避免了具有雙鏈結(jié)構(gòu)的miRNA前體的進(jìn)一步逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。M-MLV突變體逆轉(zhuǎn)錄酶具有很強(qiáng)的抗干擾能力和擴(kuò)增能力，并且擴(kuò)增效率特別好。

4x miRNA RT Buffer包含用干miRNA聚腺苷酸化和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的所有原材料和引物，包括Oligo(dT)通用標(biāo)簽引物，緩沖液和dNTPs，并經(jīng)過精心優(yōu)化，以確保多腺苷酸化和逆轉(zhuǎn)錄同時有效地進(jìn)行。

二、產(chǎn)品組分

三、保存條件 -20℃保存

四、試劑盒特點(diǎn)

無需提取RNA，直接裂解細(xì)胞，裂解產(chǎn)物經(jīng)過一步法快速高效的加尾、逆轉(zhuǎn)錄得到可用于qPCR檢測的所有 miRNA的cDNA。

30分鐘即可得到針對所有miRNA的cDNA，適用于5000個~50萬細(xì)胞的miRNA快速檢測。

后續(xù)cDNA僅用于探針法檢測，需要與EZB-miProbe-RO、EZB-miProbe，F(xiàn)ZB-miProbe-R1，EZB-miProbe-R2配套使用。