qPCR檢測(cè)目前是分子檢測(cè)的黃金標(biāo)準(zhǔn),但是它需要在實(shí)驗(yàn)室里使用專業(yè)的設(shè)備和研究員進(jìn)行操作。等溫聚合酶鏈反應(yīng),如環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)已經(jīng)成為一種適用于POCT檢測(cè)的理想方法。
邁迪安的 Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預(yù)混液是一個(gè)4x濃度的預(yù)混液,包含了優(yōu)化的凍干輔料,適用于開(kāi)發(fā)常溫穩(wěn)定的檢測(cè)。在資源有限的條件下,冷鏈儲(chǔ)運(yùn)是對(duì)POCT檢測(cè)的主要限制因素之一,常溫穩(wěn)定的檢測(cè)具有的優(yōu)勢(shì)包括減少冷鏈運(yùn)輸?shù)某杀竞脱娱L(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期等。 邁迪安公司的Lyo-Ready™RT-LAMP 1-Step Mix可凍干RT-LAMP一步法預(yù)混液,使開(kāi)發(fā)高靈敏、高性能的RT-LAMP檢測(cè)變得更容易,并且可以提供開(kāi)發(fā)液體和干燥兩種類型檢測(cè)的靈活性。
和干燥兩種類型檢測(cè)的靈活性。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 可凍干RT-LAMP一步法預(yù)混液(橙色)和供應(yīng)商N (藍(lán)色)分別對(duì)連續(xù)稀釋的登革熱2型樣本進(jìn)行擴(kuò)增,比較平均檢測(cè)時(shí)間TTR。結(jié)果表明,與供應(yīng)商N相比,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix 的反應(yīng)速度更快,TTR更早,并且重復(fù)性更高。
使用Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix(橙色)和供應(yīng)商N(藍(lán)色)分別對(duì)含有不同濃度的 (A) UTM 和痰液,和(B)唾液,以1:10稀釋的粗裂解液樣本中擴(kuò)增登革2型RNA。65°C反應(yīng)60 min。TTR為熒光強(qiáng)度超過(guò)最大熒光值10%的閾值的時(shí)間。結(jié)果表明,與供應(yīng)商N 相比,即使在有高濃度抑制物的UTM、痰和唾液中,Lyo-Ready™ RT-LAMP 1-Step Mix的平均TTR也更快,反應(yīng)更靈敏。
試劑性能不受凍干和常溫儲(chǔ)存的影響。
通過(guò)LAMP反應(yīng)分別對(duì)不含(綠色)和含有(藍(lán)色)10%UTM 和痰液 的RNA樣本使用PMSD4.1引物進(jìn)行擴(kuò)增,并且對(duì)比干燥后和新鮮配置的反應(yīng)液在37℃保存3個(gè)月后的性能。TTR為熒光強(qiáng)度超過(guò)最大熒光值10%的閾值的時(shí)間。結(jié)果表明,在37℃的條件下,凍干過(guò)程不影響Lyo-Ready™RT-LAMP Mix的穩(wěn)定性,因此可以推斷凍干后混合物的穩(wěn)定性可達(dá)1年。
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